Peptidsyntesetrinn

Vei 2,0 g blank Wang-harpiks i et rent og tørt reaksjonsrør, tilsett 15 mL DMF, romtemperaturaktivering ca. 30 min.

Ved romtemperatur, filtrer ut løsningsmidlet fra forrige trinn gjennom en sandkjerne og tilsett 1 mmol 5 molar overskudd C Første aminosyre på slutten, 5 ganger molar overskudd DMAP, 5 molar overskudd DIC, DMF Gjør løsningsmiddel romtemperaturreaksjon 3 timer. Bruk etter at reaksjonen er fullført DMF Vask 4 ~ 6 ganger, 5-6 ganger hver gang ml. Tilsett deretter en passende mengde pyridin og eddiksyreanhydrid med et volumforhold på 1:1, og reager i 30 min. Bruk etter at reaksjonen er fullført DMF Vask 4 ~ 6 ganger, 5-6 ganger hver gang ml. (effekt: Blokker de aktive mikroprikkene på den ikke-reaktive tomme harpiksen.)

Fjern løsningsmidlet fra forrige trinn ved sugefiltrering, og tilsett 10 mL 20 % piperidin DMF Løsningen tilsettes harpiksen, N2 Rør 10 min. Filtrer til slutt løsningen og tilsett 10 mL 20 % piperidin DMF løsning, N2 Blås og rør 5 min Filtrer deretter ut løsningen og gjenta denne operasjonen to ganger. DMF Vask 4 ganger, vask 2 ganger med metanol, 5-6 ganger hver gang ml.

Ta ut en liten mengde harpiks, vask den tre ganger med metanol, tilsett ninhydrin, KCN, En dråpe hver av fenolløsningen, 105 grader –110 grader Oppvarming 5 min, Å bli mørkeblå er en positiv reaksjon, noe som indikerer at fjerningen er fullført og neste trinn i reaksjonen kan utføres.; Hvis den er fargeløs, betyr det at den beskyttende gruppen ikke er fullstendig fjernet, og den ovennevnte avbeskyttelsesoperasjonen må gjentas.

Vei 3 ganger molart overskudd C Den andre aminosyren på slutten, et 3 ganger molart overskudd av HBTU og et 3 ganger molart overskudd av HOBT I reaksjonsrøret, tilsett passende mengde DMF Etter at løsningen er fullstendig oppløst, tilsett et 10 ganger molar overskudd (ren) DIEA, Romtemperaturreaksjon 40 min, bruk DMF ~ 6 ganger Vask, 4-6 ganger hver gang. Ta en liten mengde harpiks bruk Test med ninhydrin deteksjonsreagens og det vil virke fargeløst, tilsett deretter 10 mL 20% piperidin DMF Løsning fjerning Fmoc, Gjør dette to ganger i 10 min, 5 min, etter bruk DMF Vask 4 ganger, vask 2 ganger med metanol, 5-6 ganger hver gang mL. Bruk en liten mengde harpiks Bruk ninhydrindeteksjonsreagenset for å oppdage det. Hvis deteksjonen er blå, kan du fortsette til neste trinn i reaksjonen.

Til slutt bruker du trifluoreddiksyreskjæreløsning (95% TFA:2% TIS:2% EDT:1% H2O) Kutt 2 timer, Filtrer reaksjonsløsningen med sug og oppnå en trifluoreddiksyreløsning av polypeptidet. Tørk lysatet med nitrogen så mye som mulig, fell ut med eter, sentrifuger og vask deretter med eter i 3 sekunder. 5 ganger ble et hvitt fast stoff oppnådd. Etter å ha løst den i rent vann, HPLC Avsalter og rens, frys-tørre og fell ut krystaller, ta en liten mengde MS-analyse.